Les coupelles en plastique scellées et les congélateurs à basse température sont des outils essentiels qui fonctionnent comme un « bouton pause » pour l'activité biologique, préservant l'état de l'échantillon tel qu'il était au moment de la collecte.
Cette combinaison met fin efficacement aux activités physiologiques des abeilles mellifères et de tout acarien parasite. En prévenant la décomposition et en immobilisant les spécimens, ce processus garantit que les acariens ne se détachent pas ou ne disparaissent pas, assurant ainsi l'exactitude des analyses quantitatives et des identifications morphologiques ultérieures.
Idée clé L'intégrité des données sur les abeilles mellifères — qu'il s'agisse de compter les acariens ou d'analyser la génétique — repose entièrement sur la prévention des changements biologiques après la collecte. Les coupelles scellées fournissent un isolement physique pour prévenir la contamination croisée, tandis que les congélateurs (généralement -20°C) bloquent chimiquement l'échantillon pour arrêter la décomposition et la perte de parasites.
Préservation de l'intégrité physique et biologique
L'objectif principal de ce protocole d'échantillonnage est de garantir que le spécimen analysé en laboratoire est identique au spécimen collecté sur le terrain.
Immobilisation des hôtes et des parasites
L'application immédiate de basses températures (environ -20°C) est essentielle pour stopper l'activité physiologique de l'abeille mellifère et de ses parasites.
Si les échantillons restent actifs ou chauds, les acariens parasites peuvent se détacher des abeilles hôtes. La congélation immobilise les acariens, garantissant que les comptages en laboratoire reflètent les niveaux réels d'infestation de la colonie.
Prévention de la décomposition
Les abeilles mellifères se décomposent rapidement après la mort, ce qui compromet l'identification morphologique.
Le stockage à basse température inhibe la dégradation biologique des tissus. Cette préservation est nécessaire pour maintenir la structure physique de l'abeille afin de permettre une inspection visuelle et un comptage précis.
Prévention de la contamination croisée
L'utilisation de coupelles en plastique scellées et standardisées isole l'échantillon de l'environnement extérieur.
Cette barrière physique est vitale pour la détection précise de la charge pathogène, telle que les espèces de Nosema ou le virus de la paralysie chronique des abeilles (CBPV). Elle garantit que les pathogènes détectés en laboratoire proviennent de cette colonie spécifique, et non d'échantillons voisins ou d'outils de manipulation.
Assurer l'exactitude chimique et moléculaire
Au-delà des parasites visibles, les chercheurs analysent souvent la composition chimique et génétique des abeilles. Les méthodes de stockage ont un impact significatif sur la validité de ces données microscopiques.
Authenticité du microbiome
Les conteneurs en plastique stériles de qualité industrielle empêchent l'introduction de micro-organismes environnementaux.
Lors de l'analyse du microbiome des abeilles mellifères, il est crucial que les bactéries détectées proviennent du système interne ou de la surface du corps de l'abeille. Les conteneurs stériles scellés garantissent que les résultats ne sont pas faussés par des impuretés ou des outils d'échantillonnage non stériles.
Stabilité des enzymes et des lipides
Le maintien des environnements de stockage entre -8°C et -40°C inhibe la dégradation des enzymes de surface.
Cette plage de température minimise également la perte de composants lipidiques volatils. La préservation de ces marqueurs chimiques garantit que les données expérimentales représentent fidèlement l'état physiologique réel de l'abeille mellifère au moment de sa capture.
Comprendre les compromis
Bien que la méthode standard « coupelle scellée et congélateur » soit robuste, différents objectifs analytiques nécessitent des ajustements spécifiques à ce protocole.
Les limites de la congélation standard (-20°C)
Bien que -20°C soit suffisant pour le comptage des acariens et la morphologie générale, cela peut ne pas être assez froid pour tous les travaux moléculaires.
Pour le stockage à long terme impliquant des virus ou des agents pathogènes sensibles, des congélateurs à ultra-basse température (-80°C) sont souvent nécessaires. Ce froid extrême bloque plus efficacement les structures moléculaires, empêchant la dégradation des acides nucléiques sur des périodes de criblage de plusieurs années.
L'exception de « l'échantillon vivant »
La congélation est destructrice pour la vie de l'abeille, ce qui est acceptable pour la plupart des analyses structurelles et chimiques.
Cependant, si l'objectif principal est d'obtenir de l'ARN de haute qualité et non dégradé pour le suivi des titres viraux, la congélation immédiate après la collecte n'est pas toujours la meilleure approche. Dans ces cas spécifiques, des conteneurs ventilés avec alimentation en sucre sont utilisés pour transporter les abeilles vivantes au laboratoire, car maintenir l'hôte en vie empêche la dégradation de l'ARN jusqu'au moment de l'extraction.
Faire le bon choix pour votre objectif
Sélectionnez votre protocole de stockage et de collecte en fonction des données spécifiques que vous avez l'intention d'extraire de l'échantillon.
- Si votre objectif principal est la quantification des parasites (acariens) : Utilisez des coupelles scellées et des congélateurs à -20°C pour immobiliser les acariens et les empêcher de se détacher de l'hôte.
- Si votre objectif principal est l'analyse du microbiome : Privilégiez des conteneurs scellés stériles de qualité industrielle pour empêcher strictement la contamination bactérienne environnementale.
- Si votre objectif principal est le criblage viral à long terme : Utilisez des congélateurs à ultra-basse température (-80°C) pour assurer une stabilité maximale des acides nucléiques et des structures moléculaires.
- Si votre objectif principal est l'extraction d'ARN de haute qualité : Envisagez de transporter les abeilles vivantes dans des conteneurs ventilés avec de la nourriture pour prévenir la dégradation de l'ARN avant le travail en laboratoire.
Des données fiables commencent par un échantillon qui a été physiquement isolé et thermiquement stabilisé pour limiter strictement les changements biologiques.
Tableau récapitulatif :
| Facteur de préservation | Outil de stockage | Avantage principal |
|---|---|---|
| Charge parasitaire | Coupelles scellées + congélateur -20°C | Immobilise les acariens ; empêche le détachement et la perte de l'hôte. |
| Morphologie | Congélateur basse température -20°C | Arrête la décomposition ; maintient la structure physique pour l'identification. |
| Intégrité du microbiome | Conteneurs scellés stériles | Empêche la contamination croisée par des bactéries environnementales. |
| Stabilité chimique | Stockage -8°C à -40°C | Inhibe la dégradation des enzymes et la perte de lipides volatils. |
| Recherche moléculaire | Congélateur ultra-basse température -80°C | Prévient la dégradation des acides nucléiques et de l'ARN pour une étude à long terme. |
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Références
- Ivana Tlak Gajger, Maja Ivana Smodiš Škerl. Effectiveness of the innovative remedy ApiBonum ib on honeybee colony vitality. DOI: 10.46419/cvj.57.1.7
Cet article est également basé sur des informations techniques de HonestBee Base de Connaissances .
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